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[摘要] 目的：探讨姜黄素对人胃癌MGC823细胞体外增殖及凋亡的影响。方法：选用人胃癌MGC823细胞进行体外培养，采用MTT法测定不同浓度的姜黄素对MGC823细胞的增殖抑制作用，流式细胞仪监测凋亡；荧光显微镜技术和电镜技术，观察姜黄素对细胞诱发凋亡及细胞周期的变化。结果：姜黄素可明显抑制细胞的生长，其抑制率与药物浓度成剂量依赖关系。流式细胞分析仪结果表明，姜黄素能使MGC823细胞在加药后48 h出现凋亡峰。电镜观察可见姜黄素能使细胞发生凋亡，出现核边集及染色质浓缩成块状。结论：姜黄素可抑制Ec-9706细胞的生长，其机制可能与诱导细胞凋亡有关。
[关键词] 姜黄素；MGC823细胞；凋亡；胃癌
[中图分类号] R735.2 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2011）06（b）-026-02
Effects of curcumin-induced apoptosis in human colon carinoma cells
WANG Ping, CHEN Junlin
Luohe Medical College, Henan Province, Luohe 462002, China
[Abstract] Objective: To observe the effects of curcumin on proliferation and apoptosis in the human gastric carcinoma MGC823 cells． Methods: Methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay was used to detect the cell proliferation of MGC823 cells． The cell apoptos was and changes of cell cycle ofMGC823 cells were analyzed by using flow cytometry. Results: Curcumin significantly inhibited the ceil proliferation of MGC823 cells in dose, dependent manner． The results of flow cytometry showed that an apoptotic peak was found after MGC823 cells treated with curcumin for 24 h． Condensed and highly fluorescent granular cell nuclei under fluorescence microscopy and chromatin condenstation and aggregation on the nuclear margin under electron microscopy were observed in MGC823 cells treated with curcumln． Conclusion: Curcumln would inhibit the growth of colon cancer cells and the mechanism responsible for the effect might be involved in the induction of apoptosis.
[Key words] Curcumin；MGC823 cells；Apoptosis; Gastric cancer
胃癌是常见恶性肿瘤，预后较差，是人类的主要肿瘤死因之一。姜黄（curcuma longa）是姜科植物姜黄的根茎，姜黄主要成分姜黄素具有广泛的药理作用，姜黄素对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,可以抑制肿瘤细胞生长和诱导其凋亡，具有抗氧化、抗肿瘤、抗感染等多方面作用，尤其是它的抗肿瘤研究备受关注。有研究表明姜黄素能对多种肿瘤发挥肿瘤抑制作用[1- 2]，但其具体作用机制尚不明确。本实验通过不同浓度的姜黄素作用于人胃癌MGC823细胞，探讨对其增殖及促凋亡的影响。
1 材料与方法
1.1材料
MGC823细胞由郑州大学病理生理学教研室提供，姜黄素系英国 DAH 公司产品，PMI1640、四氮甲唑蓝（MTT）、二甲亚砜（DMSO）、碘化丙啶（PI）系美国 Sigma 公司产品。姜黄素购自 Sigma公司，引物购自Takara公司。
1.2 方法
1.2.1人MGC823细胞培养人MGC823细胞置于完全培养基（10%新生牛血清，IMDM培养液，pH 7.14）中，37℃， 5% CO2培养箱中培养。2~3 d传代1次，以维持细胞处于对数生长期。当细胞生长到对数生长期时，用不同浓度的姜黄素，分别为0、10、20、30、40 μmol/L处理MGC823细胞。
1.2.2 亚甲基四唑蓝（MTT）测定取对数生长期的人MGC823细胞，用0.25%的胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，以每孔 100 μl，1×104细胞数接种于 96板， 培养24 h后，弃去原培养液，用含10%的胎牛血清的RPMI1640培养液配制4种不同剂量的姜黄素（20、30、40、50 μmol/L）,于姜黄素处理24、48、72 h每孔加入MTT（5 mg/ml）20 μl，继续培养4 h后吸出培养液，加入DMSO 150 μl，振荡10 min，用酶联免疫检测仪在 570 nm下测其吸光度值。实验重复3次，计算抑制率。抑制率=（1-实验组平均OD值/对照组平均OD值）×100%。
1.2.3细胞凋亡的检测收集经（20、30、40、50 μmol/L）姜黄素作用24、48、72 h的MGC823细胞及对照组细胞，冷 PBS漂洗。预冷 700 ml/L乙醇 4℃，固定，上机检测前离心去固定液，5 g/L胃蛋白酶消化，碘化丙锭室温避光染色。流式细胞仪上机检测，应用软件进行分析。
1.2.4 形态学观察发现经姜黄素30、40、50 μmol/L处理 24 h 后，通过荧光倒置显微镜进行观察。
1.3 统计学处理
本实验数据均采用均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 11.0统计软件包处理 , 各组间比较采用单因素方差分析。
2结果
2.1 不同剂量姜黄素对MGC823细胞的影响
MTT结果显示，姜黄素分别作用24、 48、72 h后，不同剂量姜黄素对MGC823细胞均具有抑制作用（P 3讨论
姜黄素是我国传统中药姜黄根茎中的有效成分。动物实验研究发现姜黄素可抑制化学诱癌物（如 AOM、TPA、PMA等）诱发的人体膀胱癌、肝癌、宫颈癌、十二指肠癌、乳腺癌的发生。姜黄素对体外肿瘤细胞的作用报道较少。
细胞凋亡是当细胞受到内外信号刺激发生的一种由细胞、内部基因控制的、主动性的死亡行为。凋亡细胞常伴有特征性的形态学和生化改变，表现在细胞增殖抑制和细胞周期阻滞、细胞质浓缩、染色质凝集并聚集在核膜周围、细胞膜出泡、形成凋亡小体以及DNA 发生规则断裂等。目前这些变化已成为判断细胞凋亡的重要指标。
大量资料证明 ,姜黄素的抗肿瘤机制可能包括：调控癌基因和抑癌基因[3]，抗NO作用，抑制细胞增殖、诱导细胞周期停滞和细胞凋亡[4-5]，下调促血管生成基因抑制内皮细胞的迁移和入侵[6]。美国已将其作为抗癌新药，但其抗肿瘤机制还不是很明确。肿瘤细胞的侵袭与转移是恶性肿瘤的基本特征之一，尤其是在肿瘤发展的最后阶段，控制转移是决定患者预后的关键因素。目前认为恶性肿瘤的侵袭能力在其恶性转化的早期即可获得，部分肿瘤随着病情进展，其侵袭能力还有逐渐增强的趋势，黏附和侵袭的过程增加了恶性肿瘤的增殖和转移能力。
[参考文献]
[1]Yoysungnoen P,Wirachwong P,Bhattarakosol P,et al.Effects of curcumin on tumor angi ogenesis and biomarkers,COX2 and VEGF,in hepat ocellular carcinoma cell2i mp lanted nude mice[J].Clin Hemorheol Micr ocirc,2006,34(1-2):109-115.
[2]Deeb DD,Jiang H,Gao X,et al.Chemosensitizati on of hormone-refractory prostate cancer cells by curcumin to TRAIL-induced apoptosis[J].J Exp TherOncol,2005,5(2):81-91.
[3]Leu TH,Maa MC.The molecular mechanis ms for the antitu-morigennic effect of curcumin[J]. Curr Med Chem Anticancer Agents,2002,2(3):357-370.
[4]Srivastava RK,Chen Q,Siddiqui I,et al.Linkage of curcumin-induced cell cycle arrest and apoptosisby cyclin-dependent kinase inhibit or p21 (/WAF1/CIP1 )[J].Cell Cycle,2007,6(23):2953-2961.
[5]Hsu YC,Weng HC, Lin S,et al.Curcuminoids-cellular uptake by human primary colon cancer cells as quantitated by a sensitive HPLC assay and its relation with the inhibition of proliferation and apoptosis[J].J Agric Food Chem,2007,55(20):8213-8222.
[6] Yoysungnoen P,Wirachwong P,Bhattarakos ol P,et al. Effects of curcumin on tumor angi ogenesis and biomarkers, COX2 2 and VEGF, in hepat ocellular carcinoma cell2i mp lanted nude mice[J].Clin Hemorheol Microcirc,2006,34 (1-2):109-115.
（收稿日期：2011-04-06）
注：“本文中所涉及到的图表、公式、注解等请以PDF格式阅读”
