【www.zhangdahai.com--述职述廉报告】
【摘要】 目的 研究丝裂霉素C对膀胱肿瘤细胞株TBC�1 HSP70的诱导作用。方法 丝裂霉素C作用与TBC�1于2 h后,观察在不同时间点0、8、24、48、72 hTBC�1的HSP70的表达情况。结果 丝裂霉素C化疗TBC�1后不同时间点0、8、24、48、72 h的HSP70的表达OD值分别为0.306±0.005、0.255±0.009、0.203±0.018、0.237±0.029、0.239±0.020。正常TBC�1的HSP70表达OD值为0.247±0.022。结论 丝裂霉素C可以诱导膀胱肿瘤细胞株TBC�1 的HSP70的表达增高。�
【关键词】 膀胱肿瘤;丝裂霉素;热休克蛋白70
热休克蛋白 (heat shock protein，HSP)是机体受高温或其它因子强烈刺激(如感染、肿瘤、病毒、自身免疫病等)时，由热休克基因编码合成的序列高度保守的伴随细胞蛋白，并能对抗更为严重的应激损伤;HSP广泛存在于原核和真核生物。由于HSP70在大多数生物中含量最多，正常细胞内水平较低，而在应激状念下升高较为明显，因而是HSP家族中研究最多的一个。它包括68、72、73、热休克同源(Heat shock Cognate，HSC)70、grq75、78、80、Bip等多种蛋白 。HSP 70及其部分相关基因，在人类定位于第6、14、21对等染色体上，具有“分子伴侣”的作用。�
近年的研究证明,肿瘤细胞表达的热休克蛋白70 具有良好的免疫原性和肿瘤特异性［1］,具有内在免疫佐剂效应，能与多种肿瘤抗原肽结合，在体内诱导特异性主动免疫。本实验研究丝裂霉素C对膀胱肿瘤细胞株TBC�1 HSP70表达的诱导作用，了解其HSP表达的特点，以期为人膀胱癌的免疫治疗提供理论依据。�
1 材料和方法�
1.1 丝裂霉素C诱导膀胱肿瘤细胞株TBC�1的HSP70的表达 将膀胱肿瘤细胞株TBC�1消化，调整细胞浓度为1.0×106/L的细胞悬液，500 ul/孔接种于24孔板内，置37℃、5%CO�2饱和湿度下培养24 h,见TBC�1细胞贴壁。于24孔板孔内加入200 ug/ml丝裂霉素C500 ul，混匀，进行化疗，继续培养2 h后，PBS洗涤细胞数次，重新加入RPMI�1640培养基1000 ul，分别在丝裂霉素C作用TBC�1化疗后的不同时间点0、8、24、48、72 h取出盖玻片，S�P两步法行免疫细胞化学染色，一抗HSP70为单克隆抗体，DAB染色，苏木精复染。另取未经丝裂霉素处理的盖玻片做正常组。阳性对照：选取热处理的肺癌细胞株GLC�82阳性表达HSP70 ，阴性对照：以PBS缓冲液替代HSP70一抗。取正常组、0、8、24、48、72 h组免疫细胞化学染色结果行图象分析，每张玻片随机取4个视野，用图像分析仪测定各个样本的平均光密度值（OD值）。�
1.2 统计学方法 全部资料结果以（x±s）表示，采用单因素方差分析，使用SPSS10.0统计分析软件进行统计分析。�
2 结果�
丝裂霉素C化疗TBC�1后不同时间点0、8、24、48、72 h的HSP70的表达OD值分别为0.306±0.005、0.255±0.009、0.203±0.018、0.237±0.029、0.239±0.020。正常TBC�1的HSP70表达OD值为0.247±0.022。 经方差齐性检验后做方差分析，F值为12.341，（P
