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摘要：目的：建立高效液相色谱法测定新止咳合剂中橙皮苷的含量。方法：采用Dikma钻石C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇－0.2％磷酸溶液(38:62)；检测波长为283nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结果：橙皮苷进样量在0.01～2.0μg(r＝0.999 97)范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.12％，RSD=0.84％(n=9)。结论：本法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为新止咳合荆的质量控制方法。
关键词：橙皮苷；高效液相色谱法；新止咳合剂；含量测定
中图分类号：R927.2
文献标识码：A
文章编号：1007－2349(2007)09－0033－02
新止咳合剂是由桔梗、陈皮、儿茶、甘草、法半夏等药制成，具有止咳、祛痰的功效。为本院的医疗机构制剂。质量标准中没有规定含量测定方法。本文参考《中国药典~2005年版，采用HPLC法测定陈皮的主要成分――橙皮苷的含量，作为质量控制指标，获得满意的结果。
1 仪器与药品
高效液相色谱仪(美国Agilent I100系列仪)，包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTLER AE240型电子分析天平。除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。橙皮苷对照品(批号为0721―200010，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；新止咳合剂由本院制剂室配制(批号20070428、20070403、20070206)。
2 方法与结果
2．1 色谱条件色谱柱：Dikrna钻石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇－0.2％磷酸(38:62)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：283nm；进样量：5μl。理论塔板数按橙皮苷峰计算为5000。
2．2 溶液的制备精密称取橙皮苷对照品(置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，减压干燥36h)20.01mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至亥4度，摇匀，即得每1ml中含橙皮苷0.4002mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.1ml、②0.5ml、③2ml、④4ml、⑤5ml、⑥10ml、⑦20ml，分别置20ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得每Iml含①2μg、②10μg、③40μg、④80μg、⑤100μg、⑥200μg、⑦400μg的对照品溶液。取新止咳合剂20ml，用乙酸乙酯提取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，用0.45μg的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2．3 方法学考察
2．3．1 标准曲线和线性范围精密吸取橙皮苷对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦各5μl，分别注入高效液相色谱仪测定。以橙皮苷对照品含量(瞎)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标一点法进行含量测定。线性回归方程为Y＝1827.6X－4.58r＝0.99997，线性范围为0.01～2.μg。
2．3．2 精密度试验取同一橙皮苷对照品溶液④5μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，结果峰面积积分值分别为；727.1535，727.6970，730.9173，728.3321，729.3542，731.2501；积分值平均为：729.117，RSD＝0.23％。结果表明仪器精密度较好。
2．3．3 稳定性试验取同一对照品溶液④和同一供试品溶液(批号为20070428)各5ul，分别于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色谱仪测定，结果表明在24h内对照品和供试品的峰面积积分值稳定，说明测定溶液配制好后，放置24h内测定均可。
2．3．4 重现性试验 取同一批号的新止咳合剂(批号：20070428)，按供试品溶液的制备方法重复操作测定6次，结果平均含量为20.4μg/ml，RSD＝1.18％。
2．3．5 回收率试验采用加样回收法，取已知含量的同一批号(20070428)新止咳合剂(含量为：20.4μg/m1)适量，分别精密加入橙皮苷对照品适量，按供试品溶液的制备及测定法操作。
2．3．6 阴性干扰试验照上述条件测定新止咳合剂空白(不含陈皮药材制成的阴性合剂)制剂，结果在橙皮苷色谱峰相对应的保留时间处无吸收峰，说明处方中其它药味对陈皮中的橙皮苷测定无干扰。
2．4 样品含量测定按供试品溶液的制备及测定法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定，外标一点法计算。
3 讨论
橙皮苷是陈皮中主要的活性成分之一，也是新止咳合剂治疗疾病的重要成分，故选择该物质作为考察指标。
曾进行了乙酸乙酯提取次数的考察。操作同上，自“用乙酸乙酯提取5次(20、20、20、20、20m1)”，取第5次乙酸乙酯提取液单独蒸干，残渣用甲醇Iml使溶解，HPLC测定，结果没有橙皮苷吸收峰，说明用乙酸乙酯提取5次，已经全部将橙皮苷成分提尽。
本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为新止咳合剂的质量控制方法。
