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【摘要】 目的 体内外评价抗痨胶囊防治肺结核作用。方法 运用试管法观察两种制剂体外对结核菌生长的影响,运用结核豚鼠观察药物体内对结核病的防治作用。结果 抗痨胶囊体外对人型H37RV结核杆菌、牛型分枝杆菌及耐异烟肼、耐利福平、耐链霉素和联合耐异烟肼、利福平及链霉素结核杆菌的MIC和MBC分别为0.5 mg/ml和5 mg/ml、10 mg/ml和大于20 mg/ml、5 mg/ml和10 mg/ml、5 mg/ml和10 mg/ml、10 mg/ml和20 mg/ml。体内抗结核实验结果显示:抗痨胶囊可显著减少结核豚鼠肺脏的结核结节及肺脏和脾脏的结核菌数量,同时还可减轻结核豚鼠肝脏、脾脏及肺脏的炎性反应。并可显著减少豚鼠脾脏的结核结节。结论 上述结果显示,抗痨胶囊对肺结核有一定的防治作用,有一定的开发前景。
【关键词】抗痨胶囊;肺结核;药理研究
Research of effects on anti-pulmonary tuberculosis of anti tuberculosis capsule in vitro and in vivo
LI Gang.Department of pharmacy,Dazhou county people’s hospital of Sichuan Province; Dazhou county people’s hospital of Sichuan Province,635000
【Abstract】 Objective To estimate effects on anti-pulmonary tubenrculosis of anti tuberculosis capsule in vitro and in vivo.Methods Observe the growing effects of the two pharmaceutics on tubercle bacillus by test tube method in vitro,and the preventive and therapeutic effects of the drugs on guinea pigs’ modles in vivo.Results MIC and MBC of anti tuberculosis capsule onH37RV tubercle bacillus,mycobacterium bovis,tubercle bacillus resistance to isoniazid,rifampicin,streptomycin,and tubercle bacillus combine resistance to isoniazid,rifampicin,streptomycin are 0.5 mg/ml and 5 mg/ml、10 mg/ml and>20 mg/ml、5 mg/mland 10 mg/ml、5 mg/ml and 10 mg/ml、10 mg/ml and 20 mg/ml in vitro.In vivo test results showed thatanti tuberculosis capsule could decrease significantly the tubercular nodule of lung and the amount of tubercle bacillus in the lung and splenic of guinea pigs,and alleviate inflammatory reaction in liver,spleen and lung of guinea pig,and decrease significantly the tubercular nodule of spleen.Conclusion The above results showed that anti tuberculosis capsule has some preventive and therapeutic effects on pulmonary tubereulosis,and has some exploitation perspective.
【Key words】Anti tuberculosis capsule; Pulmonary tubereulosis; Pharmacology research
作者单位:635000四川省达州市达县人民医院药剂科
肺结核(pulmonary tubereulosis)是由结核杆菌引起的慢性肺部感染,常在机体抵抗力降低和细胞介导的变态反应性增高时发病。目前全球已有1/3人口约17亿人感染结核病,现有结核患者2000万。每年发生新患者约800万,每年死于结核病者约300万人。我国三次肺结核流行病学抽样调查表明,活动性肺结核患病率:1979年为717/10万,1984年为550/10万,1990年为523/10万[1]。近年来,由于耐药菌株的增加,许多以前能有效防治结核的西药的疗效受到了很大的限制,肺结核已经成为一种引起国际上高度重视的传染病。中医认为本病归属“肺痨”范畴,是由于痨虫侵蚀肺叶引起的一种具有传染性的慢性衰弱性疾病。在治疗上多采取扶正驱邪的方法,收到了较好的疗效。抗痨胶囊由百部、黄芪等数味中药组成,该方在临床用于肺结核的辅助治疗中取得了较好效果,本文拟报告该药的部分实验研究结果如下。
1 材料和方法
1.1 试验药品 抗痨胶囊剂:1 g浸膏相当于6.42 g原生药,由四川省中药研究所药化室提供。临用前用蒸馏水配成所需浓度的混悬液备用,本实验剂量按g原生药/kg计算。
利福平(RPP)胶囊:0.15 g×100粒,成都锦华药业有限公司出品,批号为080912,有效期至2010-08,临用前用0.5%CMC配成所需浓度的混悬液备用。
1.2 试验菌株 H37RV标准菌(ATCC27294):牛型分支杆菌;单耐RFP菌;单耐INH菌;单耐SM菌;耐INH+SM+RFP菌;均由中国疾病预防控制中心结核病预防控制分中心提供。
2 实验动物
豚鼠:一级动物;雌雄各半,体重:300~320 g。生产许可证号:15号,由四川省实验动物研究所提供。
3 实验环境
四川省中药研究所药理实验室,清洁级动物使用环境,合格号为:医动字第24103117号。
4 方法与结果
4.1 对细菌生长的影响
4.1.1 体外对结核菌生长的影响 最小抑菌浓度(MIC)的测定[2,3]:采用试管法,将药物分别加入苏通培养基内后,加入定时的菌液(1 mg/ml,每支接种0.1 ml),经37℃培养2周后,每支吸0.1 ml转种于2支改良罗氏(L-J)培养基斜面同时设空白对照管。在含药苏通培养基内培养2周见细菌生长的最小浓度为最小抑菌浓度。
最小杀菌浓度(MBC)的测定:将在苏通培养基内未见细菌生长的培养物,分别吸取0.05 ml接种于改良罗氏(L-J)斜面,经37℃培养4周后,所接种的2支培养基斜面上的菌落数之和少于5个的最小稀释度的药物浓度为该药的最小杀菌浓度。
表1
体外对结核菌生长的影响
菌株
抗痨胶囊利福平
MIC�(mg/ml)MBC�(mg/ml)MIC�(mg/ml)MBC�(mg/ml)
人型H37RV0.5550250
牛型分枝杆菌104050250
耐INH51050250
耐RFP51050250
耐SM51050250
耐INH+SM+RFP104050250
从表1可见,抗痨胶囊对牛型结核菌、耐INH菌、耐RFP菌、耐SM菌及耐INH+RFP+SM的结核菌均有一定的抑制或杀灭作用。
4.1.2 体内对结核感染豚鼠的作用 豚鼠经PPD测试阴性后,随机分组,分别灌胃抗痨胶囊20 g/kg、10 g/kg、5 g/kg;利福平50 mg/kg及等量蒸馏水,1次/d,连续45D。在给药后2周,除对照组外,在各豚鼠蹊部皮下注射菌悬液0.5 ml/只(将1 mg/ml的菌悬液稀释100倍)使动物感染结核杆菌。在末次给药后24 h处死动物,解剖肉眼计数每个脏器的结核结节,取肺脏、肝脏及脾脏称湿重并计算其脏器指数,然后称取一定量的组织做匀浆以便做结核菌培养,同时将各组织置于10%福尔马林中固定并做切片以便做HE染色和Z-N染色彩。结果见表2、3、4。
表2
对结核豚鼠脏器指数的影响(x±s)
组别剂量(g/kg)动物数(只)肝脏指数(g/100 g)脾脏指数(g/100 g)肺脏指数(g/100 g)
对照组103.63±0.43��**�0.16±0.03��**�0.92±0.15��**�
模型组106.13±1.020.62±0.381.54±0.72
抗痨胶囊5105.81±1.640.67±0.491.19±0.41
抗痨胶囊10105.68±0.660.31±0.17�*1.43±0.65
抗痨胶囊20115.56±0.880.55±0.321.29±0.39
利福平50 mg/kg104.39±100��**�0.15±0.03��**�0.89±0.15��**�
注:与模型组比较:�*P2检验);但抗痨胶囊可显著减少豚鼠脾脏形成结核结节的动物数,与模型组比较有统计学差异;各药物对肺脏形成结核结节的动物学均无明显影响,与模型组比较无统计学差异。
表7
对结核豚鼠脏器结构菌(Z-N染色)的影响(x±s)
组别剂量(g/kg)动物数(只)肝脏积分脾脏积分肺脏积分
对照组100±0��**�0±0��**�0±0��**�
模型组101.5±0.51.5±0.52.0±0.0
抗痨胶囊5101.2±0.41.8±0.42.0±0.0
抗痨胶囊10101.8±0.41.0±0.01.4±0.5
抗痨胶囊20110.5±0.51.0±0.01.5±0.5
利福平50 mg/kg100.0±0.0��**�0.0±0.0��**�0.0±0.0��**�
注:与模型组比较:�*P
