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【摘要】 目的 本通过研究外周血PRL水平与T淋巴细胞亚群变化的相关性,以探讨泌乳素(PRL)与免疫系统变化的关系。方法 检测100例垂体腺瘤患者及56例体检健康人外周血中CD4�+CD25�+、CD3�+、CD3�+CD4�+及CD3�+CD8�+的T淋巴细胞水平;并测定其外周血中PRL水平。 结果 病例组外周血CD3�+T淋巴细胞显著低于健康人组(P0�05);病例组外周血CD4�+CD25�+T淋巴细胞为显著高于健康人组(P100 ng/ml组(P0�05)。结论 CD3�+T淋巴细胞的减少可能是垂体肿瘤细胞本身刺激CD4�+CD25�+T淋巴细胞的增生,导致外周血IL�2减少,从而抑制了T淋巴细胞的活化和增殖。外周血PRL>100 ng/ml组外周血PRL显著升高,通过刺激各种细胞因子的分泌,而进一步促进T淋巴细胞的活化及增殖,同时,外周血中高PRL可直接抑制外周血T淋巴细胞的凋亡。�
【关键词】
泌乳素;T淋巴细胞;垂体腺瘤
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The study of the relevance of PRL and T�lymphocyte subsets in the peripheral blood
YU Jing,CHEN Lei,SU Zhi�guo,et al.
Department of Brain faculties,Fifth Central Hospital of Tiangjin,Tianjing 300450,China
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【Abstract】 Objective To investigate the relationship between PRL and immune system, the level of PRL and the changes of T�lymphocyte subsets were detected in the peripheral blood�The relevance of them was also analyzed�Methods 100 patientents with pituitary adenoma and 56 people were used� The peripheral blood of every person was collected for determining the levels of T�lymphocyte subsets of CD4��+�CD25��+�, CD3��+�, CD3��+�CD4��+� and CD3��+�CD8��+� with flow cytometry� The levels of PRL in peripheral blood were omit measured at the same time with the method of magnetic separation enzyme immunoassay as well�Results The amount of CD3��+� lymphocytes in the peripheral blood of patients was significantly lower than that in the control group (P0�05)� The amount of CD3��+�CD4��+� lymphocytes in the peripheral blood of patients was not significant different (P>0�05), and the amount of CD3��+�CD4��+� lymphocytes in the patients whose PRL level was less than 100 ng/ml was no different from the persons that in the patients whose PRL level was exceeded 100 ng/ml (P 0�05),and there was no significant difference between the groups which grouped the patients into the PRL levels� The amount of CD4��+�CD25��+� lymphocytes in the peripheral blood of patients was significantly higher than that in the normal group (P 【Key words】
Prolactin; T lymphocyte; Pituitary adenoma
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神经、内分泌和免疫系统在功能上是一个整体,它们之间相互作用、相互制约,对机体功能实施精密的调节��[1]�。垂体是神经内分泌器官,可以分泌各种激素,对机体的内分泌系统进行调控,在中枢神经系统的主导控制下,通过神经�内分泌�免疫网络的整合,协调有序地调控机体的功能,使机体对内外环境的刺激产生统一的适应性反应,以维持稳态��[2]�。同时研究证实,免疫细胞上有很多神经递质和激素的受体,神经内分泌系统通过自分泌或旁分泌的方式由神经内分泌系统分泌的细胞因子,并藉此调节免疫系统的功能��[3]�。本文通过对垂体腺瘤患者外周血PRL激素水平及T淋巴细胞亚群的分析,对神经�内分泌�免疫网络的调控机制进行进一步研究。�
1 材料与方法�
1�1 材料
本组垂体腺瘤患者共有100例,均为本院住院患者,根据临床症状、影像学检查、实验室检查及组织病理免疫组化确诊。其中男42例,女58例,年龄21～75岁,平均年龄为45岁。外周血PRL100 ng/ml者22例。正常组有56例,为正常体检健康人,其中男性25例,女性31例,年龄20~50岁。�
2 方法�
2�1 流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群
取检测者清晨(7:00)空腹静脉血,取10μl抗体于流式管中,再取患者外周抗凝血50μl于流式管中与抗体充分结合,于暗处室温孵育15 min,加450μl甲酸溶液混匀,使之溶血,再加入2 ml PBS溶液,予以1500转离心5 min,去上清液,加500μlPBS混匀,重悬,予以流式细胞仪测定外周血CD4��+�CD25��+�、CD3��+�、CD3��+�CD4��+�及CD3��+�CD8��+�T淋巴细胞。�
2�2 磁性分离酶免疫法检测PRL水平
取检测者清晨(7:00)空腹静脉血,待标本完全自然形成凝块后,予以离心,取上层血清,然后严格按照说明书进行操作,放入Access仪器进行分析测定。�
2�3 统计学方法
数据采用SPASS 16�0统计软件,结果以均数±标准差(x±s)表示,组间比较用 t检验和方差分析,各指标间进行相关分析, P100 ng/ml组(69�98±5�79)%有显著差异(t=�2�085,P=0�040�05);其中病例组中PRL100 ng/ml组(39�06±11�39)%有显著差异(t=�2�348,P=0�0210�1);其中病例组中PRL100 ng/ml组(25�08±4�34)%无显著差异(t=�1�11,P=0�27>0�05)。CD4�+CD25�+T淋巴细胞病例组为(14�47±6�98)%,显著高于正常范围(2�53±0�38)%(t=12�93,P100 ng/ml组(15�19±9�18)%无显著差异(t=�0�544,P=0�588>0�05)(表�1~2�)。�
4 讨论�
自1977年Besedovsky首次提出体内存在神经�内分泌�免疫网络的假说之后,近年来国内外对机体调控该网络的机制的研究越来越重视。T淋巴细胞是机体免疫系统中主要的调节效应细胞,可通过对抗原识别、处理、递呈引起多种细胞因子与多种细胞间的网络联系,构成维持免疫功能生理状态的平衡��[4]�。CD3�+细胞为T淋巴细胞上的标志,主要由CD4�+T淋巴细胞和CD8�+T淋巴细胞组成。其中CD4 +T淋巴细胞是T淋巴细胞中数量最多的细胞, 一般认为CD3�+CD4�+T淋巴细胞为辅助性, 可分泌IL�2和IFN�γ, 并与NK细胞有显著协同功能, 因此对防御肿瘤有重要作用。CD8�+抑制性T淋巴细胞具有与辅助性T淋巴细胞(Th)相反的作用, 可导致正常免疫应答的抑制。在正常情况下, 两者相互诱导和制约形成T细胞网络,对调节细胞免疫反应和维持免疫平衡具有重要意义。其中CD4�+T细胞中有较少(约10%)的细胞具有抑制其他淋巴细胞活性的功能,它们同时表达CD25�+��[5]�。我们的研究结果显示,垂体腺瘤患者外周血T淋巴细胞亚群CD4�+CD25�+T淋巴细胞明显高于对照组,但病例组内根据外周血激素的改变分组后,各组CD4�+CD25�+T淋巴细胞无显著差异。肿瘤患者常处于免疫功能低下状态,肿瘤细胞利用一系列逃避肿瘤免疫反应的机制得以生存和侵袭,这其中与CD4�+CD25�+调节性T细胞通过在肿瘤发生发展中抑制识别了自身肿瘤细胞的肿瘤效应细胞的发育和活化,从而介导机体肿瘤免疫耐受密不可分。我们认为垂体腺瘤患者,机体也同样存在这种肿瘤免疫,故表现为外周血中CD4�+CD25�+T淋巴细胞明显升高。国内外研究表明,CD4�+CD25�+T淋巴细胞为调节性T淋巴细胞,调节性T细胞可调节很多细胞因子的分泌,如可以使CD4�+T淋巴细胞增殖,减少IFN�γ的分泌,同时增加了IL�10和TGF�β的分泌,对各种免疫细胞均有调节作用,从而进行免疫调节。CD4�+CD25�+Treg细胞的免疫抑制机制是多方面的。CD4�+CD25�+Treg细胞上的CD25为IL�2受体α链,且CD25分子在Treg细胞上呈高表达状态,能够与效应细胞竞争结合IL�2。而IL�2是细胞增殖信号,并可以活化多种免疫细胞。在T淋巴细胞激活过程中,IL�2以自分泌、旁分泌和内分泌形式作用于T淋巴细胞,被认为是T淋巴细胞增殖的必要条件。 而外周血中CD4�+CD25�+Treg细胞增多,使得外周血IL�2减少,进一步使效应细胞无法得到生长信号而不能增殖。活化的CD4�+CD25�+Treg细胞还通过接触抑制的方式抑制T细胞的活化和增殖,并且可以分泌IL�4、IL�10和转化生长因子β(TGF�β),而IL�10与TGF�β为具有免疫抑制作用的细胞因子,促使Thl向Th2的漂移��[6]�,从而导致CD3�+CD4�+T淋巴细胞减少,使得CD3�+T淋巴细胞的减少��[7]�。这就不难解释CD3�+T淋巴细胞明显低于对照组的原因了。�
PRL是腺垂体分泌的一种激素,为一种重要的神经内分泌因子,具有细胞因子的特征,垂体PRL腺瘤患者的外周血PRL均有不同程度的升高,PRL水平的紊乱对于免疫系统会产生不同程度的影响��[8]�。我们的研究结果表明,外周血PRL100 ng/ml者,但CD3�+CD8�+T淋巴细胞与对照组无显著性差异。我们认为外周血PRL>100 ng/ml者,外周血T淋巴细胞显著增加,进一步增强了机体的免疫功能。有文献表明,高PRL血症者受多种因素的影响而使T淋巴细胞亚群比例失调,进一步使得免疫功能发生改变��[9]�。PRL可能是神经�内分泌�免疫调节网络中重要的中介体。PRL可通过协同其他细胞因子或激素以促进辅助性T细胞增生、NK细胞的细胞毒活性及活化B细胞增生及产生抗体。研究发现,PRL可诱导T淋巴细胞表面的IL�2受体表达,增加淋巴细胞对IL�2的反应性,被称为IL�2表达的第二信使。国外一些学者的实验也表明PRL可以通过上调IL�2Rα链表达而抑制外周血T淋巴细胞的凋亡。PRL还能促进DNA合成,增加C�Myc基因的表达,在淋巴细胞增生调节中具有重要作用。PRL对B细胞的功能也有影响,主要表现在对活性B细胞分泌IgM和IgG功能的促进作用。PRL通过与外周血中各免疫细胞表面PRL受体结合,发挥其免疫调控机能。外周血中的PRL与胸腺上PRL受体结合后,刺激胸腺上皮细胞产生胸腺素,胸腺素又可促进淋巴组织生长和淋巴细胞的分化与活化。由此可见,PRL在体液免疫和细胞免疫中均具有重要的调节作用。同时免疫细胞自身也可分泌PRL ,所以PRL是神经内分泌系统和免疫系统之间联系的共同语言之一��[10]�。但也有学者研究,发现长期高PRL血症可使患者耐受,并且阻止了患者对PRL的急性免疫刺激效应。急性高PRL血症可通过免疫细胞作用而导致PRL受体表达的增加,但持续高PRL血症则不能��[11,12]�。这说明,垂体PRL腺瘤患者外周血中T淋巴细胞的变化不仅仅受外周血PRL水平的影响,还受其病程长短的影响。�
因此,我们认为CD3�+T淋巴细胞的减少可能是垂体肿瘤细胞本身刺激CD4�+CD25�+T淋巴细胞的增生,导致外周血IL�2减少,从而抑制了T淋巴细胞的活化和增殖,即表现为CD3�+CD4�+T淋巴细胞减少,使得CD3�+T淋巴细胞的减少。对于外周血PRL100 ng/ml组,我们考虑PRL>100 ng/ml组外周血PRL显著升高,通过刺激各种细胞因子的分泌,而进一步促进T淋巴细胞的活化及增殖,同时,外周血中高PRL可直接抑制外周血T淋巴细胞的凋亡。�
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