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【摘要】 目的 探讨细胞间粘附因子1(Intercellular adhesion molecule，ICAM-1)基因第4外显子G241R(721G→A)与第6外显子K469E(1405A→G)多态性与中国北方汉族人Graves病(GD)的相关性。方法 运用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术，检测了202例中国北方汉族人的血清sICAM-1水平和ICAM-1基因第4外显子G241R(721G→A)与第6外显子K469E(1405A→G)多态位点的等位基因和基因型，其中初诊Graves病患者139例，按发病年龄分为早发GD组(发病年龄和晚发GD组(发病年龄≥40岁，61例)两个亚组；健康对照组63例。应用统计软件SPSS11．0分析，各组间的等位基因频率和基因型比较用卡方检验。结果 ①�ICAM-1�基因第4外显子721G→A多态位点存在G、A两种等位基因和GG、GA、AA三种基因型；②ICAM-1基因第6外显子1405A→G多态位点存在A、G两种等位基因和AA、AG、GG三种基因型；③ICAM-1基因第4外显子721G→A多态位点的A等位基因和GA基因型频率在早发GD组高于晚发GD组和健康成人组。结论 ①中国北方汉族人ICAM-1基因第4外显子存在721G→A多态，A等位基因可能是早发GD的易感等位基因；②中国北方汉族人ICAM-1基因第6外显子存在1405A→G多态，但这种基因多态变化与GD患者发病年龄无相关性。�
【关键词】Graves病；细胞间粘附因子1；基因多态
The associative study of Intercellular adhesion molecule 1’s gene polymorphism in Graves disease
LI Ying，XU Ai-mei.Qingdao Central Hospital,Shandong Qingdao 266042,China
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【Abstract】 Objective To investigate the association between Intercellular adhesion molecule1(ICAM-1)with the polymorphism of it’s the forth exon G241R(721G→A)and the sixth exon K469E(1405A→G)and the Graves disease of Chinese Hans in northern China.Methods The serum ICAM-1 concentration and the allele of its the forth exon G241R(721G→A)and the sixth exon K469E(1405A→G)were determined by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)and the PCR sequence-specific primers method(PCR-SSP)in 202 Chinese Hans in northern China,including 139 patients of Graves Disease(GD).According to the age when GD occured,the GD cases were divided into two groups,the early-onset group including 78 cases(2 test.A two-tailed P value[1-2],有显著的遗传倾向，目前发现它与HLA类型有关[1]。ICAM-1是一条分子量约80~100ku的糖蛋白，具有5个跨膜结构，是LFA-1分子的天然配体之一，其基因定位在19号染色体上[3-4]。GD最显著的病理组织学特点是甲状腺、眼睛等效应器官内淋巴细胞的浸润，血液循环中的淋巴细胞向效应部位的迁徙首先是通过其与血管内皮细胞的相互作用来启动，二者相互作用的前提是内皮细胞的活化，�ICAM-1�可以加强内皮细胞的活化过程[5]。
1 材料与方法
1．1 研究对象及分组
1．1．1 研究对象 202名无血缘关系的山东地区汉族人，均为青岛市中心医院内分泌科住院或门诊患者及体检健康成人，其中初诊未治疗GD患者139名，均具有典型的高代谢症群，不同程度弥漫性甲状腺肿伴或不伴甲状腺外损害(眼征，胫前黏液性水肿)，实验室检查血FT3>5．6 pmol/L，FT4>25．5 pmol/L，sTSH 1．1．2 分组 GD组 139例，男/女=26/103，年龄16~67岁，平均(45．24±7．26)岁。根据发病年龄分为两个亚组：①早发GD(EGD)组：发病0．05)、FT3、FT4、TSH、TRAB、TGAB、TPOAB均有显著性差异(P0．05)。(见表1)。
2．2 ICAM-1基因第4外显子721G→A多态与GD的相关性
2．2．1 ICAM-1基因第4外显子721G→A多态检测结果 在PCR扩增结果中显示引物1、4组或1、5组反应体系得到片段的，证明第4外显子721位为G等位基因；而引物2、4组或2、5组反应体系得到片段的，第4外显子721位为A等位基因。根据等位基因判断具体患者的基因型有三种情况，分别为GG、GA、AA。(见表2)。
2．2．2 ICAM-1基因第4外显子721G→A多态位点不同基因型和等位基因与GD的相关性 GD组的三种基因型频率与CON组无明显差别(P>0．05)，G等位基因频率和A等位基因频率与CON组无明显差异(P>0．05)；但EGD组GA+AA基因型频率显著高于LGD组和CON组(P2检验符合Hardy-weinberg遗传平衡定律，说明所研究人群有群体代表性。(见表3)。
2．3 ICAM-1基因第6外显子1405A→G多态与GD的相关性
2．3．1 ICAM-1基因第6外显子1405A→G多态检测结果 在PCR扩增结果中显示引物1、4组或2、4组反应体系得到片段的，证明第6外显子1405位为G等位基因；而引物1、5组或2、5组反应体系得到片段的，第6外显子1405位为A等位基因。根据等位基因判断具体患者的基因型有三种情况，分别为GG、GA、AA。(见表4)。
2．3．2 ICAM-1基因第6外显子1405A→G多态位点不同等位基因与GD的相关性 GD组的三种基因型频率与CON组无明显差别(P>0．05)，GD组的A等位基因频率和G等位基因频率与CON组无明显差异(P>0．05)； EGD组GA基因型频率与LGD组无明显差异(P>0．05)，EGD组与LGD组的A等位基因频率和G等位基因频率也无明显差别(P>0．05)。(见表5)。
2．4 统计学方法 计量资料用（x±s）表示，各组均数之间的比较用方差分析。运用Hardy-Weinberg检验样本的群体代表性。用基因计数法计算各组等位基因频率，各组间等位基因频率的比较用卡方检验，P[2，6-7]。另外，基因组研究发现GD的其他遗传异感基因位点在染色体14Q31，18Q21，20Q11以及XQ21[8-9]。�
现在所得出的结论是基于早期关于ICAM-1基因多态性的研究。前期研究发现ICAM-1基因多态性与多种人类自身免疫性疾病有关。外显子4C721G-A使氨基酸链第241位由甘氨酸变为精氨酸,外显子6C1405A-G使第469位由赖氨酸变为谷氨酸。现已证实：ICAM-1结合点区(外显子４)与第五抗原相似区(外显子６)的基因多态性可以改变ICAM-1的特性：细胞黏附与共同趋化能力[10]。推测这种ICAM-1功能区的氨基酸替代可以改变ICAM-1结构和功能从而影响GD的临床表现。可以提高巨噬细胞功能．其他免疫递呈细胞相关的细胞因子(HLA及CTLA-40)的基因多态性可以影响GD的易感性和发病年龄[2，6]。�
现已所知ICAM-1的基因多态性可以调节某些自身免疫疾病的免疫状态[11-12]。例如：1型糖尿病、多发性大动脉炎以及克隆氏病[13-15]。等位基因A(R241)的高表达,C721GA(G241R)以相应的自身抗体在溃疡性结肠炎患者中发现[16]。另外,与研究结果相一致的是，Nishmura等发现ICAM-1基因的第6外显子基因多态性与1型糖尿病的发病年龄有关[13]。移植后肾衰的患者ICAM-1基因第C.721位等位基因A是肾移植后长期存活者的两倍，受者ICAM-1E469的变异与急性的肾移植后肾衰有关[11]。�
简而言之，研究结果显示ICAM-1基因多态性可能影响甲亢的发病年龄。其原因可能是由于ICAM-1基因多态性造成氨基酸替代而影响自身免疫反应的强度和持续性，是ICAM-1抗原类似区与受体结合后的结果。在动物模型中已经显示：通过腺病毒基因技术短暂性地阻断LFA-1/ICAM-1通路可以防止自身免疫的发生而不引起经典的免疫抑制[17]。笔者推测这种技术可以调整ICAM-1的结构，从而推迟GD发病年龄，延长缓解期，以及对GD的临床表现有一些影响。�
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