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【摘要】 建立三七中皂苷HPLC含量测定分析方法，通过比较三七中主要成分人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1的含量，探讨三七地下部位中皂苷的分布情况。结果表明：在三七地下部位中，总皂苷以剪口为高，筋条最低，不同大小的主根之间没有明显区别。同一部位中各皂苷的含量Rg1>Rb1>R1。�
【关键词】三七；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1、Rb1；高效液相色谱
The Test of saponin in underground structure ofpanax notogineseng by HPLC and the comparison their content
XU Chong-yang，FU Hai-yun，HUANG Li-xia，et al.Zhejiang Hisun Pharma.CO.，LTD.,Zhejiang Taizhou 318000,China
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【Abstract】 Establish the analysis method for determination of the content of saponin in panax notogineseng by HPLC.Discuss the distribution situation of saponin in underground position of panax notogineseng by comparing the content of ginsenoside Rg1 and Rb1 and notoginsenoside R1 in panax notogineseng.The results show that the content of total saponinin in rhizome is the highest and rootlet is the lowest while no significant difference of content exist in different sizes of main root.In the taproot,the contents of different saponin is as following：Rg1>Rb1>R1.�
【Key words】Panax Notoginseng；Notoginsenoside R1；Ginsenoside Rg1、Rb1；HPLC
三七(Panax Notoginseng)为五加科人参属植物三七的根，是传统的中药材，其性温味甘微苦，具止血、活血化瘀和消肿止痛的功效。现代药理研究证明其主要的活性成分为皂苷，目前大多用于止血活血、抗心、脑、肝缺血、冠心病及心律失常等疾病的防治[1-2]。本文探讨其皂苷的含量及地下各部位中皂苷的分布。
1 材料与方法
1．1 仪器、试剂及实验材料 Agileng 1100 高效液相色谱仪，MWD检测器，色谱柱Agileng Eclipse XDB-C18(5μm,4．6 mm×250 mm)，岛津紫外分光光度计UV-2550，电子天秤 METTLER TOLEDO AB104-N，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1对照品购自中国药品生物制品检定所，乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇为分析纯，纯化水，供试品自制。三七购自云南文山。
1．2 供试品的制备 将三七根茎、主根、支根三个部位各规格粉碎过40目筛，各样品于50℃减压干燥，测定干重，精密称取10 g用60%乙醇100 ml回流提取3次，每次2 h[3],合并提取液减压浓缩至小体积，加入纯化水，再浓缩至无醇味，通过AB-8大孔吸附树脂柱层析[4]，分别用水和乙醇洗脱，乙醇洗脱部分减压浓缩至干[5]，50℃减压干燥至恒重，得总皂苷，称重。精密称取总皂苷，用90%甲醇定容。
1．3 HPLC定量测定方法
1．3．1 吸收波长的选择 经岛津紫外分光光度计进行光谱测定，人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1的对照品溶液分别在200~300 nm范围进行光谱扫描，结果人参皂苷Rg1在203 nm处有最大吸收，人参皂苷Rb1、三七皂苷R1也有很好吸收，本实验选择测定波长为203 nm。
1．3．2 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：Agileng Eclipse XDB-C18(4．6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：乙腈(A)、水(B)，梯度洗脱，A：0~22 min，20%40%，22~23 min，A：40%20%，23~30 min，A：20%，流速：1 ml/min 检测波长：203 nm，柱温30℃，理论板数按人参皂苷Rg1计算不得低于6000，分离度大于1．5，用外标峰面积计算含量。见图1。
1．3．3 标准曲线 对照品在50℃减压干燥至恒重，精密称取，用90%甲醇定容，分别配制含Rg1(3．02、1．51、0．604、0．302、0．0302、0．00302 mg/ml)，Rb1(3．08、1．54、0．616、0．308、0．0308、0．00308 mg/ml)、R1(4．2、2．1、0．84、0．42、0．042、0．0042 mg/ml)，各对照品浓度分别进样10 μl,以峰面积-浓度作线性方程，得对照品的线性关系，结果R1线性范围0．004 2~4．2 mg/ml，方程Y=2431．2 X+133．18，R2=0．999 2，Rg1线性范围0．003 02~3．02 mg/ml，方程Y=3227．8X+16．403，R2=0．999 9,Rb1线性范围0．003 08~3．08 mg/ml，方程Y=2415．8 X+27．419，R2=0．999 9。�
1．3．4 方法重现性试验 对同一批样品进行6次方法重现性试验，以外标法测定含量，计算RSD。�
RSD值：Rg1：0．40%,Rb1：1．02%，R1：0．43%。
1．3．5 加样回收率试验 精密量取已知量的供试品溶液样品各3份，分别加入不同量的对照品，按含量测定的方法测定，计算回收率。结果为R1平均回收率为99．49%，Rg1平均回收率为 101．88%,Rb1平均回收率102．37%。见表1。
2 样品测定�
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，并按1．3．2色谱条件进行测定(图2)，每种规格批取4份，外标法计算，结果所测得的供试品3种成分含量(表2)。�
3 供试品稳定性试验�
取同一供试品溶液分别在0、6、12、24 h进样，RSD分别为R1：0．8%，Rg1：0．6%,Rb1：1．2%。
4 结果与讨论�
三七总皂苷的检测方法许多文献报道用比色法[4-5]，比色法操作繁琐，并且不能准确检测其中各皂苷的含量，本文初步探讨三七总皂苷的高效液相色谱方法，使得各皂苷达到很好的分离，以人参皂苷Rg1计算，理论板数大于6 000，分离度也大于1．5，完全符合高效液相色谱条件。�
三七地下部位由根茎(又称剪口)、主根、支根(又称筋条)组成，剪口、筋条及不同大小的主根在市场上的价格有差别，其总皂苷以剪口为高，各皂苷含量Rg1>Rb1>R1，为工业化提取皂苷、合理利用三七加工过程中产生的剪口、筋条提供依据。�
参考文献
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［2］ 郑虎占，董泽宏，佘靖主编.中药现代研究及应用.学苑出版社，1997.
［3］ 于宗渊，黄丁毅，苏本正.正交试验优选三七的提取工艺.时珍国医国药，2004，15(6)，357.
［4］ 吴少雄，王保兴，郭祀远,等.三七叶苷的提取分离与纯化.食品与发酵工业，2005，31(１):149-151.
［5］ 谢茵，邢桂琴，刘秀芬，三七提取液中三七总皂苷的分离纯化工艺研究.山西医科大学学报，2006，37(6):613-615.
