【www.zhangdahai.com--其他范文】
刘建华，孔丽宇，万建伟，苏倩榕，李景华，韩丽琴
(吉林医药学院,吉林 吉林 132013)
肝细胞癌是侵袭性恶性疾病，我国是肝癌高发区[1]。化疗药物毒副作用较为严重，且治愈后易复发[2]。传统中药的抗癌研究已成为当前的研究热点，如苦参中的苦参碱、枇杷叶中的齐墩果酸、高良姜中的高良姜素和粉防己中的汉防己甲素都可用于治疗肿瘤[3]。黄芪为豆科黄耆属植物[4]，具有改良心肌功能、抵御病毒、抗癌等功能[5]，其活性成分黄酮类化合物是一种以黄酮(2-苯基色原酮)为母核而衍生的黄色色素,具有清除自由基、抗病毒等作用。刺五加是五加科五加属植物刺五加的干燥根或茎[6]，具有抗衰老、降血脂、抗炎等药理作用，主要活性物质之一是黄酮类化合物。
本研究采用流式细胞术测定黄芪黄酮和刺五加黄酮对HepG-2细胞增殖抑制作用，为深入探索黄酮类化合物抑制HepG-2细胞增殖机制提供参考。
1.1 材 料
黄芪、刺五加，市售，经吉林医药学院李景华副教授鉴定为真品。
1.2 主要仪器与试剂
T6新世纪紫外可见分光光度计；
JHBE-30A分析型闪式提取器(上海钒帜精密设备有限公司)；
高速冷冻离心机；
ZW-A微量振荡器；
CKX41SF显微镜；
iMark酶标仪(Bio-Rad Laboratiories,inc)；
Muse细胞状态分析仪(德国MerckMillipore公司)；
DMEM培养基；
碘化丙啶；
四甲基偶氮唑蓝；
EDTA胰酶；
DMSO；
DHA；
其余试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。
1.3 黄芪黄酮、刺五加黄酮的闪式提取
黄芪、刺五加黄酮的提取参照文献[5]。药品经机械粉碎后过60目筛，准确称取5.000 g，按照料液比1∶20，以乙醇为溶剂进行闪式提取，过滤后将残渣用乙醇反复冲洗，得总黄酮提取液，95%乙醇沉淀后干燥得黄酮固体，备用。
1.4 细胞形态观察
在96孔细胞板上接种细胞密度为1×104个/孔的细胞悬液，置于细胞培养箱中，细胞长满孔底后倒掉上层液体，以每孔100 μL不同浓度的黄芪黄酮(10、50、100 μmol/L)和刺五加黄酮溶液(50、100、200 μmol/L)为实验组，无药物等体积的细胞培养液孔为空白组，显微镜下采集图像，放大倍数为400倍。
1.5 抑制HepG-2肝癌细胞增殖实验
选用生长状态良好的HepG-2肝癌细胞，向培养瓶中加入2 mL PBS缓冲液润洗1次，2 mL胰酶消化2 min后，分别混入含有20 μL黄芪黄酮、刺五加黄酮的培养液中，吹匀细胞，1500 r/min离心5 min后去除上层液体，取少量细胞悬液滴于计数板，盖上盖玻片，置于显微镜下计数。
1.6 细胞分析仪检测细胞凋亡
再次选用生长状态良好的HepG-2肝癌细胞，控制细胞密度在1×105/mL，每孔2 mL接种于六孔板内。放置培养箱培养至细胞贴壁生长，加药后培养24 h。在各组加入DHA，培养24 h后收集细胞。PBS润洗，胰酶消化，1500 r/min离心5 min，弃去培养液，加100 μL重悬细胞，加入100 μL Muse细胞分析仪凋亡试剂盒染料，Muse细胞分析仪检测细胞凋亡。
2.1 细胞形态实验结果
与细胞空白对照组相比，两种黄酮在5～50 μmol/L浓度作用于细胞中，细胞变化效果不明显；
黄芪黄酮和刺五加黄酮浓度达到100 μmol/L时，细胞疏松，细胞间相互嵌合，触角明显；
刺五加黄酮浓度达到200 μmol/L时，细胞已经大量脱壁死亡，形态变圆；
而黄芪黄酮在浓度为100 μmol/L与刺五加黄酮抑制效果相似。由此可见，两种黄酮对HepG-2细胞有一定的抑制作用，但浓度较小时抑制效果不明显，黄芪黄酮对肝癌细胞抑制效果明显(见图1)。
2.2 流式细胞术结果
流式细胞仪检测凋亡结果显示，黄芪黄酮和刺五加黄酮作用HepG2细胞24 h，细胞凋亡比例明显增加，抑制率与黄酮浓度呈正相关，与对照组相比，黄芪黄酮给药组随给药浓度的升高，HepG2细胞凋亡率明显升高。刺五加黄酮浓度达到600 μmol/L时，抑制率为20%；
而黄芪黄酮浓度在300 μmol/L时抑制率已经达到9.11%，抑制率明显高于刺五加黄酮(P<0.05)，具有统计学意义(图2、图3)。
刺五加 黄芪
图 2 刺五加黄酮流式细胞术结果
图 3 黄芪黄酮流式细胞术结果
黄酮类成分具有抑制活性氧和氧自由基的作用，副作用低于有机化学物质，因此黄酮类成分已成为制药行业科研网络的热点之一[7]。2种黄酮化合物具有较好的HepG-2细胞凋亡坏死率，流式细胞仪检测结果均显示其活性与浓度正相关，而黄芪黄酮对HepG2细胞抑制率明显高于刺五加黄酮，测定结果揭示了黄芪黄酮可能是通过诱导HepG2细胞凋亡而达到治疗肝癌的作用，为进一步研究黄酮抗肿瘤活性机制提供依据。
猜你喜欢 抑制率黄酮类分析仪 Sekisui CP3000与STA Compact Max凝血分析仪检测项目比对分析现代仪器与医疗(2022年3期)2022-08-12经皮血气分析仪TCM4的结构原理及日常维护保养与常见故障处理现代仪器与医疗(2022年2期)2022-08-11SYSMEX XN-550全自动血液分析仪的校准及性能评价现代仪器与医疗(2022年2期)2022-08-11超声辅助提取藜麦黄酮工艺优化及抗氧化性食品工业(2022年5期)2022-06-13银杏叶片中5种银杏双黄酮类成分同时测定方法的建立中国药房(2022年10期)2022-05-30玉林市先天性甲状腺功能减低症筛查TSH切值在GSP分析仪上的设定中国典型病例大全(2022年13期)2022-05-10双酶水解鱼鳞蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化研究现代农村科技(2022年1期)2022-01-21蔬菜使用不同处理方式对农药残留影响的研究食品界(2021年7期)2021-07-19一种黄酮类荧光探针的合成及用于肼的检测分析化学(2018年4期)2018-11-02黄酮类化合物药理作用的探讨成长·读写月刊(2017年7期)2017-07-13本文来源：http://www.zhangdahai.com/shiyongfanwen/qitafanwen/2023/0424/588805.html
