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【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定口炎清片中绿原酸含量的方法。方法 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈-0．4%磷酸溶液（13∶87）为流动相；检测波长为327nm，流速为1．0 ml/min，柱温：30℃，进样量10 μl。结果 绿原酸在0．053 4～0．534 g（r=0．999 9）之间呈良好的线性关系。 绿原酸平均回收率:99．38%（RSD=1．31%,6例）。结论 本方法简便、准确、重现性好。
【关键词】 口炎清片；绿原酸；高效液相色谱法
Determination of Constiuent in tablet of kou yan qing by HPLC
MENG Xing-yun,ZHAO Ruu-qin;FANG Dong-jun,The six pharmaceutical Factory of Haerbin pharmaceu-tical group．harerbin 150056,China
【Abstract】 Objective To establish a method of HPLC determination of chlorogenic acid in tablet of Kouyanqing.Methods SHIM-PACK-C18 column was used with a mobile phase of acetonitrile－4% phosphoric acid（13∶87）;detector wavelength 327nm; flow rate 1．0 ml/min; column temperature at 30℃;injecting volume 10 μl. Results Chlorogenic acid showed the good linear relationship at the range of 0．0534 g～0．534 g（r=0．9999）respectively；it average recoveries was:99．38%（RSD=1．31%,6）respectively.Conclusion The methods is simple, accurate and reproducible.
【Key words】Tablet of Kouyanqing；Chlorogenic acid；HPLC
口炎清片是在原口炎清颗粒的基础上进行的中药改剂型，有滋阴清热，解毒消肿的功能。用于阴虚火旺所致的口腔炎症。在对原剂型改革的同时，对原质量标准也进行了提高。建立了以高效液相色谱法测定口炎清片中绿原酸含量的方法，对提高中药制剂质量监控，完善质量标准体系具有实际应用意义。
1 仪器与试药
1．1 仪器
日本岛津CS-Light 工作站（日本岛津LC-10ATVP泵），日本岛津HPD-10ATVP紫外检测器。
1．2 试药
绿原酸(编号11805-200306)中国生物制品检定所，口炎清片（本单位自行改剂型研制，批号070417）。乙腈为色谱纯，所用其他试剂均为分析纯。
2 结果
2．1 色谱条件[1] 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂, 日本岛津SHIM-PACK色谱柱（4．6 mm×150 mm,5 μm）。
流动相：乙腈-0．4%磷酸溶液（13∶87）为流动相；流速：1．0 ml／min；柱温：30℃。检测波长：327 nm；进样量10 μl。
2．2 对照品溶液的制备
精密称取对照品绿原酸2．67 mg，加入50%甲醇适量使溶解，并转移至25 ml容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，制成每1 ml含绿原酸0．106 8 mg的溶液。
2．3 线性关系考察
精密吸取“2．2”项下对照品溶液0．25、0．5、1．0、1．5、2．0、2．5 ml分别转移至50 ml棕色容量瓶中，加50%稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液各10 μl，按“2．1”项下色谱条件进样，测定峰面积，分别以绿原酸峰面积积分值(A)为纵座标，进样浓度(C)为横座标进行线性回归，得绿原酸回归方程为：y＝8 490．38+1 350 129．031x（r＝0．999 9）,在0．053 4～0．534 g之间呈良好的线性关系。
2．4 稳定性试验
取同一批号口炎清片（批号070417）15片，除去薄膜衣，研细，取粉末0．5 g，精密称定，按“2．8”项下方法操作，再精密吸取供试品溶液10 μl，根据设定间隔时间0、1、2、3、4、5 h，按“2．1”项下色谱条件进样，测定峰面积。结果，绿原酸平均峰面积值为263 653．08 (RSD=1．11%,6例)。绿原酸在5 h之内稳定。
2．5 精密度试验 取同一批号口炎清片（批号070417）15片，除去薄膜衣，研细，取粉末0．5 g，精密称定，按“2．8”项下方法操作，再精密吸取供试品溶液10 μl，按“2．1”项下色谱条件连续进样6次，10 μl/次，测定峰面积；结果，绿原酸平均峰面积值为268 358．02 (RSD=1．17%,6例)。本方法精密度良好。
2．6 重现性试验
取同一批号口炎清片（批号070417）15片，除去薄膜衣，研细，取粉末0．5 g，精密称定6份，按“2．8”项下方法操作。再精密吸取供试品溶液10 μl，按“2．1”项下色谱条件进样，测定峰面积，计算绿原酸含量。结果，绿原酸平均含量为2．77 mg/g（RSD=1．59%,6例）。重现性较好。
2．7 回收率试验
取同一批号口炎清片（批号070417）10片，除去薄膜衣，研细，取粉末0．25 g，精密称定，分别加入绿原酸对照品0．534 mg，混匀，按“2．8”项下供试品溶液的制备方法操作。精密吸取供试品溶液10 μl，按“2．1”项下色谱条件进样，测定峰面积，计算回收率。结果，苦参碱和氧化苦参碱平均回收率为99．38%（RSD=1．22%，6例）。
2．8 样品含量测定[2]
取口炎清片，除去薄膜衣，研细，称取粉末0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，取本品15粒，倾出内容物，称取粉末0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理（250 W，频率35 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量续滤液3 ml，置5 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。结果见表1。
3 讨论
3．1 本实验通过对口炎清片中绿原酸含量测定，达到了有效的控制制剂质量的目的。口炎清片是在原口炎清颗粒的基础上进行的剂型改革，对于改革后的剂型片剂，要遵循服用剂量相等于原口炎清颗粒剂型的服用剂量的原则，所以在工艺上做了相应的改革，尤其针对处方中金银花中绿原酸热不稳定的特点，在提取中做了方法学的改革，因此在质量控制过程中，通过对制剂中绿原酸测定结果的考察，含量获得了提高，验证了改革后的提取方法是行之有效的。
3．2 在原制剂的含量测定的指标基础上，对于改革后的剂型片剂中金银花所含成分绿原酸的含量测定，制订了适合改革后的剂型质量标准，达到控制新剂型质量的目的，本方法快速，准确，行之有效。
参考文献
1 国家药典委会编.中华人民共和国药典(一部)2005年版.北京化学工业出版社．
2 王巧懿，朱染枫,等.HPLC测定润喉宝片中绿原酸含量.中国药学杂志 2005；40(20): 1907.
“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”。
