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【摘要】 目的 采用高效液相色谱法建立氧氟沙星滴眼液有关物质检查及其含量测定方法。方法 phenomenex Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)以醋酸铵高氯酸钠溶液(取醋酸铵4.0 g和高氯酸钠7.0 g,加水1300 ml使溶解,用磷酸调节pH值至2.2)-乙腈(85:15)为流动相;检测波长294 nm;流速1.0 ml/min;进样量10 μl。结果 制剂中辅料对主药测定无干扰,氧氟沙星与有关物质完全分离。在3.2~16.0 μg/ml范围内峰面积与浓度线性关系良好。精密度(RSD=0.85%)良好。回收率均在98%~102%范围内。结论 本方法简便,迅速,准确,可用于氧氟沙星滴眼液的质量控制。
【关键词】
氧氟沙星;滴眼液;高效液相色谱法;含量测定;有关物质氧氟沙星系第三代喹诺酮类抗菌药,抗菌活性系抑制细菌DNA促旋酶,阻断DNA的合成,从而产生快速杀菌作用[1]。氧氟沙星滴眼液能减轻眼外部感染,它不仅具有抗革兰阴性菌,而且有抗革兰阳性菌及绿脓杆菌等广泛的抗菌谱,诺氟沙星与氧氟沙星虽均系第三代喹诺酮类药物,但氧氟沙星抗菌谱较诺氟沙星更广,抗菌作用更强[2]。本文采用高效液相色谱法测定氧氟沙星滴眼液的含量及其有关物质,方法灵敏度高,重复性好。
1 仪器与材料
高效液相色谱仪(SHIMADZU UV-VIS Detector SPD-10A,Pump LC-10AT);色谱柱:Shim-pack:vp-ods column size:150 L×4.6 serial No:7072834;厂家:SHIMADZU;氧氟沙星对照品(含量98.4%)中国生物制品检定所;氧氟沙星滴眼液(5 ml:15 mg)自制。
2 方法与结果
2.1 波长的选择 取氧氟沙星对照品溶液(浓度为0.12 mg/ml),在200~400 nm波长进行紫外吸收扫描,在294nm处有最大吸收,参照中国药典2005年版氧氟沙星滴眼液标准,选择294nm作为本品的检测波长。氧氟沙星滴眼液样品的紫外扫描结果如图1。
2.2 色谱条件 色谱柱:SHIMADZU VP-ODS150 L×4.6;流动相:醋酸铵高氯酸钠溶液(取醋酸铵4.0 g和高氯酸钠7.0 g,加水1300 ml使溶解,用磷酸调节pH值至2.2)-乙腈(85:15);取氧氟沙星适量,用0.1 mol/L的盐酸溶液溶解并稀释制成每1毫升中含1 mg的溶液,置紫外光灯(254 nm)下照射4 h以上,取10 μl注入液相色谱仪,理论板数按氧氟沙星峰计算不低于5000,紧邻氧氟沙星峰前的杂质峰与氧氟沙星峰的分离度应符合规定。紫外灯照射的样品的HPLC图谱见附图2。
2.3 线性试验 取氧氟沙星对照品溶液浓度为0.24 mg/ml的溶液,分别精密量取此溶液3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml、6.0 ml、7.0 ml,置10 ml量瓶中,用0.1 mol/L的盐酸溶液稀释至刻度。各吸取10 μl注入液相色谱仪,记录色谱图。进行线性范围的考察,结果得回归方程:y=3E+07x + 111990,r=0.9995。氧氟沙星浓度在0.071~0.165 mg/ml范围内线性良好。
2.4 精密度实验 取070403批样品1份,按含量测定项下方法制备供试品,重复进样六次,结果表明此方法测定氧氟沙星滴眼液含量的精密度较好。
2.5 稳定性实验 取精密度项下的溶液,按含量测定方法测定,在0 h,2 h,4 h,6 h,8 h,10 h进行测定,结果平均峰面积为3455082.458,RSD=0.89%,供试品溶液在10 h内是稳定的。
2.6 回收率试验 精密称取氧氟沙星对照品约9.6、12、14.4 mg各3份,分别置50 ml量瓶中,同时按处方比例加入辅料,用0.1 mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取滤液5 ml置10 ml量瓶中,用0.1 mol/L的盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,按含量测定方法测定,计算回收率。结果表明:该方法回收率均在98%~102%范围内,平均回收率为99.8%,RSD为0.42%,符合规定,适用于氧氟沙星滴眼液的含量测定。
2.7 含量测定 照高效液相色谱法(2005年版药典二部附录)测定。
phenomenex Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)以醋酸铵高氯酸钠溶液(取醋酸铵4.0 g和高氯酸钠7.0 g,加水1300 ml使溶解,用磷酸调节pH值至2.2)-乙腈(85:15)为流动相;检测波长294 nm;流速1.0 ml/min;进样量10 μl,本试验采用外标法测定氧氟沙星滴眼液中物质含量,对照品溶液制备:精密称取对照品0.01228 g,置100 ml容量瓶中,加0.1 mol/L的盐酸溶解并稀释至刻度,摇匀即得。样品溶液制备:量取070403批样品六份,格2 ml,置50 ml容量瓶中,用0.1 mol/ml盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密称取一定量,注入仪器,记录色谱图,测定对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积按下式计算含量:含量(Cx)=Cr×Ax/Ar,Cx为供试品的浓度;
Cr为对照品的浓度;Ax为供试品峰面积;Ar为对照品的峰面积。
2.8 三批中试样品的含量测定结果 本品三批样品含量测定结果见表1,见图3-5。
结果表明:三批样品的含量均在90.0%~110.0%之间符合规定。
2.9 样品有关物质的测定 取三批样品,按上述方法检查,结果见表2。
结果表明,单个杂质峰面积≤0.5%,各杂质峰面积的和≤1.0%。
3 讨论
氧氟沙星滴眼液采用高效液相色谱法建立氧氟沙星滴眼液有关物质检查及其含量测定方法。以醋酸铵高氯酸钠溶液(取醋酸铵4.0 g和高氯酸钠7.0 g,加水1300 ml使溶解,用磷酸调节pH值至2.2)-乙腈(85:15)为流动相;检测波长294nm;流速1.0 ml/min;进样量10 μl。制剂中辅料对主药测定无干扰,氧氟沙星与有关物质完全分离。在3.2~16.0 μg/ml范围内峰面积与浓度线性关系良好。精密度(RSD=0.85%)良好。回收率均在98%~102%范围内。本方法简便,迅速,准确,可用于氧氟沙星滴眼液的质量控制。
参 考 文 献
[1] 汪茂先,黄坚伟,陆永昌,陈晓艳,李萍.浓氧氟沙星注射液工艺研究及稳定性考察.广东药学,1998(2):19-22.
[2] 徐镜海,何同胜.新一代抗菌药:氧氟沙星滴眼液.医药导报,1996,(15):19.
[3] 俞犄,王义明,罗国安.氧氟沙星对映体的毛细管电泳手性分离.药学学报,1997,32(3):203-206.
[4] 王尔华,张秀芝,吴葆金,董善士.氧氟沙星及其注射剂中有机杂质的分离、鉴定和合成.中国药科大学学报,1996,27(8):449-454.
[5] 弓巧娟,晋卫军,董川.氧氟沙星对映体的同步-导数荧光光谱法识别与测定.分析化学,2000,28(6):672-677.
