【www.zhangdahai.com--企业管理范文】
【摘要】目的:观察月华胶囊对结核小鼠肝的病理学影响。方法:采用尾静脉注射H37RV结核杆菌造模，随机分为模型组、西药组、月华胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组、月华胶囊中剂量与西药联合组，建立空白对照组；光镜下观察肝的病理变化。结果:与模型组比较，其余各组肝脏病理改变均较模型组轻；月华胶囊3个剂量组比较，中剂量组肝病变较轻；与单用西药或月华胶囊的各剂量组比较，联合用药组肝病变最轻。结论:月华胶囊能减轻结核杆菌对小鼠肝的病理损害，中剂量组效果优于低、高剂量组，所有用药组中联合用药组优于其它单独用药组。
【关键词】月华胶囊；结核杆菌；肝；小鼠；病理学
【中图分类号】R285【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0103-01
20世纪90年代初，全球结核病出现新的趋势，无论是发达国家还是发展中国家，结核病疫情又呈上升之势，以至结核病在新世纪中仍然是严重危害人类健康的主要传染病，已构成重大的公共卫生和社会问题［1］。西药联合化疗方案仍为抗结核的主流，而结核菌的耐药及抗结核药物对人体的毒副作用已成了化学治疗的两个明显弱点。月华胶囊为清代医家程钟龄所制的传统抗痨名方月华丸改革剂型而成，动物实验研究表明，月华胶囊能通过改变Ｔ淋巴细胞亚群CD4+、CD4+／CD8+及其TH1型细胞因子IFN-γ、IL-2、TH2型细胞因子IL-10和TNF-α的变化进行免疫调控，起到对耐多药结核鼠的免疫治疗作用［2］，现将其对结核杆菌感染小鼠肝脏的病理学影响结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料:（1）动物：健康NIH小鼠140只，清洁级，体质量（20±2）g，雌雄各半，由湖南中医药大学动物实验中心提供，合格证号为：医动字第20-001号。（2）菌液：①细菌来源 美国实验菌种保护中心(ATCC)，型号为H 37Rv，编号27294。②制备 菌株在改良罗氏培养基上培养3周，挑取生长良好的菌落加入有玻璃珠的试管中磨菌，加入含0.05％tween-80的灭菌生理盐水轻轻摇动，调制成浓度为1×105 CFU/mL的菌悬液。（3）药物： ①月华胶囊 由天冬、麦冬、沙参、生地、熟地、阿胶、山药、茯苓、百部等组成，经湖南中医药大学第一附属医院制剂科制备，0.8g/粒（相当于不含辅料的浸膏粉），成人2.4g/d ，实验时将胶囊去壳，内容物用40℃蒸溜水溶解，并配制成胶囊内容物含量分别为相当于临床等效剂量的28 mg/mL、56mg/mL、112mg/mL的低、中、高3个剂量。 ②化疗药 化疗方案为RHZ，异烟肼（H）由沈阳红旗制药有限公司生产，批号：120001006， 0.1g/片，0.3g/d；利福平（R）由沈阳红旗制药有限公司生产，批号：120002017，0.15g/片，0.45g/d；吡嗪酰胺（Z）由沈阳红旗制药有限公司生产，批号：120001032，1.5g/片，1.5g/d 。每次用蒸溜水配制成化疗药物含量为13mg/mL的溶液供小白鼠灌胃用。（4）仪器及场地： ①仪器 江南双目光学显微镜（江南光学仪器厂）；LKB－VI型超薄切片机（瑞典）；DM－LB2莱卡生物摄影显微镜（德国）。 ②场地 实验场地与一般实验室隔离，阳光充足，通风良好，温度控制在（19±2）℃，相对湿度40~70%，室内安装有排风扇、紫外线消毒灯。
1.2 方法：（1）动物造模：取140只小鼠，雌雄各半。先进行体重分层，按随机原则抽取雌雄各6只小鼠作为正常组后，余下的小鼠全部以尾静脉注射0.2mL 浓度为1×105CFU/mL的结核菌液造模，穿刺部位压迫止血2min。（2）动物分组：造模后将小鼠随机分为模型组、西药化疗组、月华胶囊低剂量组、月华胶囊中剂量组、月华胶囊高剂量组、月华胶囊联合西药组（以下分别简称模型组，西药组，低、中、高剂量组和联合组），共7组，每组12只，雌雄各半，分笼饲养，造模小鼠与正常组小鼠隔离饲养。（3） 动物给药：①给药剂量：以60kg成人，20g小鼠按体表面积进行换算，西药组（0.325g/kg.d）、低剂量组（0.7g/kg.d）、中剂量组（1.4g/kg.d）、高剂量组（2.8g/kg.d）、联合组（西药RHZ0.325g/kg.d+月华胶囊中剂量1.4g/kg.d），正常组、模型组给予相应等容积的蒸馏水；②给药方法：灌胃给药，连续30d；③灌胃体积：体积为20mL/kg.d；④给药时间：造模后第1天开始，每天上午给相应药物1次，联合组先给月华胶囊中剂量，隔１h后再给西药。（4）病理形态观察：各组小鼠分别取肝脏，以10％甲醛溶液固定，脱水，浸腊包埋，5μm连续切片，HE染色，光镜下观察各组小鼠肝脏的病理形态学改变。
2 结果
光镜下观察肝脏：①正常组小鼠肝小叶结构完整、清晰，肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列，未见炎性细胞浸润、坏死等病理改变（见图中1）。②模型组小鼠可见增生性病变，广泛肝细胞局限性坏死，充血明显，汇管区大量淋巴细胞浸润，肝细胞水肿、空泡样变性，可见多核巨噬细胞（见图中2）。③西药组小鼠肝脏亦可见病理改变，但病变程度较模型组轻，其间质炎症、局灶性炎症较明显，可见细胞水肿变性，未见结核小节（见图中3）。④月华胶囊3个剂量组中，病变程度均较模型组轻，均未见结核小结形成。其高剂量组肝脏可见明显局灶性炎症区伴坏死区（见图中4）；其中中剂量组肝脏结构基本完整，偶见局灶性炎症（见图中5）；低剂量组可见明显炎症及玻璃样变性组织（见图中6）。⑤联合组镜下未见病理改变，结构形态正常（见图中7）。
3 讨论
结核病属中医“痨瘵”、“虚痨”范畴，“痨瘵主乎阴虚，阴虚者十之八九。”月华胶囊由天冬、麦冬、生地、熟地、山药、百部、沙参、川贝、阿胶、茯苓、三七、白及、党参、菊花、桑叶等组成。具有滋阴润肺、清热生津、健脾平肝、杀虫止血的功效。肝脏为结核杆菌血行传播感染的易感脏器之一。从模型组小鼠肝脏光镜下观察，结核杆菌对肝脏产生了病理性损害。而在用药各组的小鼠肝脏观察到受损程度相对显明要轻，尤其以中西联合用药组小鼠其受损程度最轻。一方面可证实月华胶囊对结核感染小鼠的早期预防感染或直接抑杀结核杆菌作用，同时联合组与单用西药化疗药物组之间的比较结果，亦可能提示了月华胶囊对西药化疗药物所致肝脏损害的保护效果。早有报道，在RFP致肝损伤的大鼠模型中，肝脏病理学检查结果示:肝细胞多发性坏死灶，细胞固缩，胞浆深染，胞核变形、浓缩，并伴炎性细胞浸润［3］，INH, RFP和PZA均为WHO推荐的标准短程化疗方案的重要组成部分，用于结核病联合化疗，虽然治愈率高，但上述药物均有肝细胞毒性，多药联合应用肝损伤发生率更高，程度也更重［4］。
参考文献
［1］张立兴.中华流行病学杂志［J］.中国结核病控制工作面临的挑战2004;25（8）:645
［2］欧阳建军,伍参荣，白宇乾等.月华胶囊对耐多药结核鼠T淋巴细胞亚群及TH1/ TH2细胞因子的影响［J］.中国实验方剂学杂志：2006（9）：28-31
［3］张志仁,徐顺清,陈志飞.硫酸锌对利福平致肝损伤的预防作用［J］.中国药理学与毒理学杂志2000;14(3):-222-251
［4］Malcolm A, Steele MD. Toxic hepatitis with isoniazid and rifampin- a meta-analysis［J］. Chest, 1999;2:465-471.
